1.材料準備
底板及墊料選擇：選取合適的底板，如塑料或硬質紙板等，作為檢測卡的基礎支撐。同時準備樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊等材料，確保它們的質量符合要求且相互匹配。
抗體與配體準備：準備好玉米赤霉烯酮的特異性抗體、羊抗鼠抗體（用于質控線包被）、熒光微球標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體以及相關的抗原、偶聯劑等生物試劑。這些試劑的活性和純度對檢測卡的性能至關重要。
化學試劑與緩沖液配制：配置各種所需的化學試劑，如碳二亞胺（EDC）、N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）等用于蛋白偶聯反應；準備不同 pH 值的緩沖液，如磷酸鹽緩沖液（PBS）、MES 緩沖溶液等，用于調節反應體系的酸堿度。
2.硝酸纖維素膜處理
檢測線包被：將玉米赤霉烯酮半抗原-載體蛋白偶聯劑通過特定的方法固定在硝酸纖維素膜上，形成檢測線。例如，先將玉米赤霉烯酮半抗原溶解于 DMF 中，加入 EDC，然后將制得的溶液逐滴緩慢滴加到溶解有 BSA 的 CB 溶液中，攪拌反應后，再用 PBS 透析，得到 ZEAO 偶聯產物，將其包被于硝酸纖維素膜上形成檢測線。
質控線包被：將羊抗鼠抗體包被于硝酸纖維素膜上，形成質控線，以監測檢測過程中試劑的有效性和操作的正確性。
3.乳膠微球與抗體偶聯
乳膠微球預處理：在乳膠微球中加入 MES 緩沖溶液，混勻后離心洗滌，去除雜質和未反應的基團。
抗體偶聯：按照一定的比例將 NHS 和 EDC 加入到乳膠微球中，混勻后孵育一段時間，使乳膠微球表面活化。然后離心洗滌、去上清液，加入 ZEA 抗體至終濃度為 0.6mg/mL，混勻后反應一段時間。再次離心去除上清，用 2％的 BSA 進行封閉和清洗，最后將乳膠微球懸浮于儲存緩沖溶液中，混勻并保存于冰箱中備用。
4.組裝與干燥
組件粘貼固定：將樣品墊、已包被好的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼固定在底板上，確保各組件之間緊密連接且位置準確，避免出現氣泡或縫隙。各組件的長度和搭接寬度需符合設計要求，以保證檢測過程中液體能夠順利通過毛細管作用在各組件間流動。
干燥處理：將組裝好的檢測卡在一定溫度下進行烘干過夜處理，使各組件之間的粘貼更加牢固，同時也有利于去除殘留的水分和有機溶劑。
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